Ludzki rekombinowany czynnik antyhemofilowy pochodzący z DNA (czynnik VIII) w leczeniu hemofilii A cd

Próbki odwirowano w temperaturze 4 ° C przez 30 minut przy 10 000 do 15 000 x g. Osocze przeniesiono następnie do jednorazowej plastikowej rurki, szybko zamrożonej w mieszaninie alkoholu i suchego lodu, i przechowywano w -70 ° C aż do oznaczenia. Poziomy czynnika VIII w osoczu mierzono w laboratoriach badawczych Cutter Biological, jednoetapowym testem krzepnięcia opartym na aktywowanym czasie częściowej tromboplastyny 11 i wyrażanym jako procent czynnika VIII obecnego w puli normalnego ludzkiego osocza. Próbki osocza przechowywano w -70 ° C i testowano w ciągu 15 minut od rozmrożenia. Kontrolne zamrożone osocze rozmrożono w celu oznaczenia, a standardowe krzywe rozcieńczeń przygotowano dla każdej serii oznaczeń, aby zapewnić wewnętrzną konsystencję. Rozcieńczone próby standardowe, kontrolne i testowo-próbne przeprowadzono dwukrotnie. Współczynnik zmienności dla oznaczeń 93 czynnika VIII wynosił 7,9 procent. Poziomy inhibitora czynnika VIII mierzono w uczestniczących instytucjach metodą Bethesda. 10 Przeciwciała skierowane do mysiej IgG, białka niemowlę-chomika i nerki oraz rekombinowany czynnik VIII badano w Cutter Biological metodą ELISA i zgłaszano jako negatywne, graniczne lub pozytywne (wyrażone jako 1+, 2+ lub 3+).
Analiza farmakokinetyczna
Krzywe zaniku in vivo dla czynnika VIII z badań farmakokinetycznych analizowano metodami niezależnymi od modelu (analiza momentów) 12 w celu obliczenia całkowitego klirensu (wyrażonego jako mililitry na godzinę na kilogram, ogólnej szybkości, przy której osoczu usuwa się czynnik VIII), średni czas przebywania (w godzinach, analogicznie do okresu półtrwania i, z definicji, czasu, w którym traci się 63,2% czynnika VIII), pozorna objętość dystrybucji (wyrażona w mililitrach na kilogram, określona jako stosunek między ilość substancji obecnej w organizmie w dowolnym czasie i odpowiadające jej stężenie w osoczu) oraz okres półtrwania w fazie eliminacji (w godzinach) w stanie ustalonym, określony z części końcowej (12, 24, 30 i 48 godzin po wlew) logarytmiczno-liniowej krzywej zaniku in vivo.
Przyrostowe wartości odzysku in vivo obliczono ze wzrostu powyżej linii podstawowej (wyrażonego jako procent normalnej wartości stężenia VIII czynnika VIII w osoczu) 10 minut po zakończeniu infuzji podzielonej przez ilość czynnika VIII podawanego w jednostkach międzynarodowych na kilogram . Wartości odzysku rekombinowanego czynnika VIII porównano z wartościami uzyskanego z osocza czynnika VIII za pomocą dwustronnego sparowanego t-testu.
Koate-HS, komercyjny liofilizowany koncentrat czynnika VIII pochodzącego z osocza (poddany obróbce cieplnej w 60 ° C w roztworze przez 10 godzin), zastosowano w porównawczych badaniach farmakokinetycznych. Rekombinowany czynnik VIII, czynnik antyhemofilny wytwarzany techniką rekombinacji DNA, został przygotowany przez firmę Cutter Biological. Ludzki komplementarny DNA (cDNA) dla czynnika VIII został transfekowany do ustalonej linii komórek ssaczych (nerka dziecięca-chomika), która następnie wydzielała zrekombinowany czynnik VIII do podłoża do hodowli tkankowej.7 Wydzielane białko oczyszczono za pomocą kilku etapów oczyszczania, w tym jonizacji. chromatografia wymiany i chromatografia immunopowinowactwa z mysim przeciwciałem monoklonalnym. Rekombinowany czynnik VIII składa się z wielu peptydów, w tym białka o masie 80 kD i różnych rozszerzeń białek podjednostek 90 kDa.
[podobne: lioven, szkła progresywne cena, climax control skład ]